AAT Bioquest 5522 Amplite® Colorimetric Biotin Quantitation Kit 200Tests 

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美國(guó)AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學(xué)研究、診斷研發(fā)及藥物開(kāi)發(fā)的科學(xué)家研發(fā)、生產(chǎn)和銷(xiāo)售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。AAT Bioquest的產(chǎn)品幫助quan世界的科學(xué)家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學(xué)，免疫學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域。AAT Bioquest會(huì)不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個(gè)領(lǐng)域的產(chǎn)品。

AAT Bioquest5522 Amplite® Colorimetric Biotin Quantitation Kit 200Tests，產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品品牌：AAT Bioquest

產(chǎn)品貨號(hào)：5522

產(chǎn)品名稱(chēng)：Amplite®比色生wu素定量試劑盒

英文名稱(chēng)：Amplite® Colorimetric Biotin Quantitation Kit

產(chǎn)品規(guī)格：200 Tests

 AAT Bioquest Amplite比色生wu素定量試劑盒

產(chǎn)品說(shuō)明：

親和素/鏈霉親和素-生wu素相互作用是蛋白質(zhì)與其配體之間已知zui強(qiáng)的非共價(jià)生物相互作用（Kd = 10-15 M-1）。一種親和素結(jié)合四種生wu素。生wu素和親和素/鏈霉親和素之間的鍵形成非常迅速，一旦形成，就不受pH值，有機(jī)溶劑和其他變性劑的影響。親和素和鏈霉親和素都具有基本上不可逆的生wu素結(jié)合特性，因?yàn)榻Y(jié)合的生wu素只能通過(guò)使蛋白質(zhì)的亞基變性來(lái)釋放。生wu素及其衍生物與各種親和素的緊密和特異性結(jié)合已在許多生物學(xué)應(yīng)用中得到了廣泛的探索。Amplite® 比色生wu素定量試劑盒提供了一種方便的方法，用于估計(jì)生wu素-蛋白質(zhì)偶聯(lián)物中生wu素與蛋白質(zhì)的摩爾比或定量溶液中的生wu素濃度。該測(cè)定采用HABA（4'-羥基偶**-2-羧酸），這是一種與親和素結(jié)合時(shí)顯示顯著光譜變化的試劑。生wu素很容易從HABA/親和素復(fù)合物中置換HABA，導(dǎo)致500nm處的吸收減少。該試劑盒*適合用于測(cè)定2至16μM 范圍內(nèi)的生wu素濃度。該測(cè)定可以以比色皿或微孔板形式進(jìn)行。

組件

組分A：親和素 1瓶

組分B：HABA檢測(cè)緩沖液1瓶 （40mL）

組分C：d-生wu素1瓶（200μL、100μM）

示例協(xié)議

一目了然

協(xié)議摘要

1. 制備 HABA/親和素測(cè)定混合物（180μL）

2. 添加測(cè)試樣品（20μL）

3. 在室溫下孵育5分鐘

4. 監(jiān)視器在500nm處的吸光度下降

重要

在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，將所有試劑盒組分解凍至室溫。

儲(chǔ)備溶液的制備

除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

親和素儲(chǔ)備液（100X）

添加 400 μL ddH2O放入親和素（組分A）的小瓶中，充分混合。

注意 未使用的100X親和素儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在-20C下儲(chǔ)存。

工作溶液的制備

HABA/親和素檢測(cè)解決方案

將 200μL 親和素儲(chǔ)備溶液（100X）加入20mL HABA 檢測(cè)緩沖液（組分B）中，并充分混合。

注意HABA/親和素測(cè)定混合物的未使用部分可能在4°C下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)一周。

實(shí)驗(yàn)方案樣本

注意有必要在幾次稀釋度下測(cè)試含生wu素的樣品，以確保生wu素的濃度在測(cè)定線性范圍內(nèi)，即2-16μM的生wu素（最終濃度）。

注意 避免使用含鉀的緩沖液，因?yàn)樗鼤?huì)導(dǎo)致測(cè)定中的沉淀。

注意 游離生wu素必須通過(guò)凝膠過(guò)濾或透析與生wu素化蛋白分離。

1. 各加入20μL含生wu素的樣品，陰性對(duì)照（ddH2O或用于溶解含生wu素樣品的相同緩沖液），并將陽(yáng)性對(duì)照（組分C）放入表96和表1中所述的2孔透明底部微孔板中。

2. 向含生wu素樣品、陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照的每個(gè)孔中加入 180 μL HABA/親和素測(cè)定溶液，使生wu素測(cè)定總體積為200μL/孔。

注意 對(duì)于比色皿形式，將100μL樣品與900μL HABA/親和素測(cè)定混合物一起加入。

3. 通過(guò)在5-100rpm的搖板器上振蕩，在室溫下孵育反應(yīng)混合物200分鐘，避光并避免在移液過(guò)程中產(chǎn)生氣泡。

4. 用吸光度酶標(biāo)儀在500nm處監(jiān)測(cè)吸光度下降。

 AAT Bioquest Amplite比色生wu素定量試劑盒

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